上海卫计委在Advanced Science发表特氟龙不粘锅涂层杀伤精子论文

最早是一些科普类公众号提到的，因为有完整的论文标题，

Therapeutic Repair of Sperm Quality Decline Caused by Polytetrafluoroethylene

所以可以用微软bing搜索原始出处：

https://advanced.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202505148

然后就是鼠标圈选，复制到KimiAI（https://www.kimi.com/chat/）里，建议选1.5版本下，进行翻译。

为了节省时间我少复制了很多内容。光结果就上万字了，简单剧透一下，在上海以外的地方抽检了100多人，精子里有多种微塑料，微塑料越多精子成活率越低，不过其他几种塑料要混合后才能达到降低有统计学显著性，特氟龙是只要多了它一种就有显著性；然后给老鼠吃特氟龙，很快弄出了精子成活率下降模型。

之后找作用靶点，有个Src集美相关磷酸化蛋白2，即SKAP2被认为是可能的靶点，用携带了SKAP2蛋白的外囊泡给老鼠注射可以恢复受孕率，体外对已经被PTFE弄得活力下降的精子补充SKAP2进行公孵化实验，能改善活性，但无法修复已经导致的畸形。另外老鼠实验中发现停止服用特氟龙微塑料颗粒一个月也不能恢复精子活性和浓度，血睾屏障的破坏是持续的，且对老鼠的性激素分泌水平也发生了负面影响等等。

总之父母那代人固执的认为吃塑料是不好的，这个直觉真对！

我前些年还以为只有全氟辛酸铵PFAS那类肾毒性分散剂，或者Gen-X全氟丙氧基二丙酸那类肝毒性分散剂直排入江河湖海产生了污染不好，现在看来我还是被厂家水军洗脑了，呸！特氟龙这玩意它本身脱落，就有可能是微米纳米级的，就有可能穿透血睾屏障（其实这实验应该也做一些老鼠老年痴呆方面的研究，杜克大学有给老鼠吃聚苯乙烯诱发大脑斑块的实验，https://www.nature.com/articles/s41591-024-03453-1 证明微塑料穿透血脑屏障也不是不可能的）。

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摘要：……（省略）本研究报告了PTFE在男性泌尿生殖系统中的高检测率（46.62%）和生物累积，并在人类和小鼠中研究了PTFE暴露对男性生育能力的影响，同时探索了潜在的治疗策略。这些发现表明，PTFE暴露会延迟精原细胞和精母细胞的发育，破坏染色体联会和DNA损伤反应，并促进精母细胞的凋亡。有趣的是，PTFE暴露特异性地靶向单倍体精子细胞中的SKAP2，导致精子细胞骨架破坏、精子形态异常和精子活力下降。令人惊讶的是，针对SKAP2的治疗可以重塑精子细胞骨架和形态，并在人类和小鼠中恢复精子活力和男性生育能力。综上所述，这些研究揭示了PTFE暴露损害精子发生机制，并强调了SKAP2靶向作为一种治疗人类弱畸精子症的有前景的治疗策略。……（省略）

2 结果

2.1 聚四氟乙烯暴露与人类精子质量下降相关

为了研究PTFE微塑料暴露对精子质量的影响，我们从中国四个不同省份的133名男性参与者那里收集了精液和尿液样本，并使用拉曼显微镜和热解气相色谱-质谱联用（PY-GC-MS）检测微塑料（图1A）。值得注意的是，我们发现PTFE，这种广泛用于不粘锅具的有害涂层材料，与精液质量高度相关。暴露于PTFE的参与者表现出总精子数（比值比（OR）（95%置信区间（CI）），4.91（0.81, 29.57），p = 0.083）和前向运动能力（OR（95% CI），2.29（0.96, 5.49），p = 0.062）的显著减少，分别增加了4.91倍和2.29倍的风险（图1A）。进一步分析显示，PTFE在46.62%的人类精浆和尿液样本中被检测到（62/133），表明PTFE在人体中的存在是广泛的（表S1，支持信息）。计算机辅助精子分析（CASA）分析表明，与未暴露PTFE相比，PTFE暴露导致总精子数（p < 0.001）、前向运动能力（p < 0.05）和精子形态（p < 0.10）的减少（图1B–D）。为了检验PTFE暴露对精子质量的剂量依赖效应，我们使用PY-GC-MS定量了精浆和睾丸中的PTFE浓度（表S2，支持信息）。线性回归分析表明精浆中PTFE浓度与精子数（p < 0.01）、前向运动能力（p < 0.001）和正常精子比例（p < 0.001）之间存在显著的负相关（图1E–G）。此外，在人类睾丸中，我们也观察到随着PTFE浓度的增加，精子质量下降（图1H–J）。同时，人类精浆和睾丸中PTFE的生物累积效应随着年龄的增长而加剧，加重了对男性生殖系统的持续损害（图1K,L）。使用Diff-Quik染色和电子显微镜对精子样本进行形态学分析，发现顶体脱落和头部畸形的发生率增加（图1M–O）。此外，在鞭毛的中部、主体和末端部分，鞭毛“9+2”微管结构受损和精子个体化异常的比例显著增加（图1P）。综上所述，这些数据表明PTFE暴露可能导致精子结构异常，强调了其对男性生殖健康的潜在风险。……（省略）

2.4 PTFE暴露破坏人类和小鼠的雄性激素代谢

为了研究PTFE暴露对精子代谢的影响，我们对人类精浆和尿液进行了代谢组学分析。对照组和PTFE暴露组之间差异代谢物的分析显示，与氨基酸生物合成相关的代谢物如庚二酸和莽草酸，以及与氧化还原反应相关的代谢物如脱氨基酪氨酸、乙酰香草醛和肌肽显著失调（图4A）。这些发现表明PTFE暴露可能损害蛋白质合成并诱导氧化损伤。随后，我们分析了小鼠睾丸组织和精浆之间对照组和PTFE暴露组的差异代谢物（图4B）。二氢睾酮作为显著不同的代谢物出现，表明PTFE破坏了雄性激素代谢。上述四组差异代谢物的维恩分析显示，肌肽是人类和小鼠精浆中的共同差异代谢物，二氢睾酮是小鼠睾丸和精浆中的共同差异代谢物（图4C），表明氧化损伤和激素失衡可能有助于PTFE暴露引起的生殖损伤。

PTFE暴露破坏雄性激素代谢。A）热图展示了人类精浆和尿液的代谢组学特征。数据来自人类精浆和尿液样本（对照组，32名受试者；PTFE暴露组，37名受试者）。人类精浆数据包括对照组（56名受试者）和PTFE暴露受试者（17名受试者）。颜色表示代谢物的相对表达量，值在渐变色块中显示。VIP，变量在投影中的重要性。条形长度表示代谢物对两组之间差异的贡献值。条形颜色表示两组样本之间代谢物的显著差异（P值）。B）热图描绘了小鼠睾丸和精浆的代谢组学特征（n = 3）。

颜色表示代谢物的相对表达量，值在渐变色块中显示。VIP，变量在投影中的重要性。条形长度表示代谢物对两组之间差异的贡献值。条形颜色表示两组样本之间代谢物的显著差异（P_value）。C）维恩图显示了来自（A,B）的四个组之间的代谢物重叠。D）对人类精浆中差异表达代谢物进行基因本体（GO）富集分析。E）对小鼠精浆中差异代谢物进行基因本体（GO）富集分析。F,G）直方图显示了对照组和PTFE暴露小鼠的血清睾酮（T）和二氢睾酮（DHT）水平。通过ELISA测定睾酮和DHT水平，使用450 nm的光度计光度法获得吸光度读数（两者内部CV和外部CV均<10%）。数据以均值±SD表示。NS表示不显著。p值使用Student's t检验（双侧）与对照组比较计算。H,I）直方图展示了TM3细胞中的血清睾酮（T）和二氢睾酮（DHT）水平。通过ELISA测定水平，使用450 nm的光度计光度法获得吸光度读数（两者内部CV和外部CV均<10%）。数据以均值±SD表示。NS表示不显著。p值使用Student's t检验（双侧）与对照组比较计算。

进一步对这些差异代谢物进行功能富集分析表明，激素代谢是两个物种中最显著富集的途径（图4D,E）。为了验证激素失衡，我们测量了小鼠的血清睾酮和二氢睾酮水平，并表明随着PTFE浓度的增加，血清激素水平逐渐下降（图4F,G）。鉴于睾丸间质细胞主要负责雄性激素的产生，我们在体外测试了TM3（一种小鼠睾丸间质细胞系）的雄性激素分泌。与对照组相比，PTFE暴露组的雄性激素分泌直接下调（图4H,I），这与体内发现一致。总之，这些结果表明PTFE暴露破坏了睾丸间质细胞的雄性激素分泌，可能有助于男性生殖毒性。

2.5 PTFE暴露诱导生殖细胞和间质细胞的凋亡

为了检查PTFE暴露对精子发生的影响，进行了单细胞测序（图5A）。从对照组和PTFE暴露组的小鼠睾丸组织中总共鉴定出22个簇（图5B），并在两组中可视化了细胞分布（图5C）。细胞被注释为六个不同的群体（图5D,E），基因表达模式在气泡图和特征图中显示（图5F；图S4，支持信息）。细胞比例分析显示，在PTFE暴露组中，生殖细胞的比例显著减少，而未知细胞的比例增加（图5G）。为了探索潜在机制，基因本体（GO）富集分析表明差异表达基因在与生殖细胞“凋亡”和“分化”相关的功能中显著富集。在间质细胞中，与“凋亡”和“激素代谢”相关的生物过程也得到富集（图S5A,B，支持信息）。此外，单细胞分析显示生殖细胞、间质细胞、支持细胞和未知细胞群体中凋亡细胞的比例显著增加（图S5C,D，支持信息）。此外，凋亡基因的表达，包括Bax和Caspase-3，在生殖细胞和间质细胞中显著增加（图S5E,F，支持信息）。体外和体内实验表明PTFE暴露在GC-1（小鼠精原细胞系）、GC-2（小鼠精母细胞系）、TM3（小鼠间质细胞系）和SOX9阳性支持细胞中诱导凋亡（图S5G–K，支持信息）。

对照组和PTFE暴露小鼠睾丸的单细胞转录组分析。A）单细胞RNA测序实验设计的流程图。B）UMAP（均匀流形近似投影）图展示了对照组和PTFE暴露小鼠样本的睾丸细胞的聚类，揭示了22个不同的生物学亚型。C）UMAP图展示了对照组和PTFE暴露小鼠睾丸细胞的单细胞转录组数据的聚类分析，聚类以颜色编码并标记。D,E）UMAP图突出了来自对照组和80 g L−1 PTFE暴露小鼠睾丸的单细胞文库中的七个簇。F）点图描绘了对照组和PTFE暴露小鼠睾丸细胞中典型标记基因的表达。G）对称条形图展示了对照组和PTFE暴露样本中各种细胞类型的数量和百分比，细胞计数和百分比清晰标记。向上和向下的箭头表示细胞百分比的变化。

为了进一步表征生殖细胞中的凋亡，将亚群注释为精原细胞、精母细胞、圆形精子细胞和长形精子细胞（图S6A，支持信息）。UMAP分析揭示了对照组和PTFE暴露组中细胞的分布（图S6B,C，支持信息），小提琴图（图S6D，支持信息）和热图（图S6E，支持信息）为不同细胞类型提供了基因注释。GO富集分析显示差异表达基因（DEGs）在精原细胞中“凋亡”异常表达，在精母细胞中“DNA双链断裂（DSB）修复”异常表达（图S6F，支持信息）。这表明PTFE暴露主要在精原细胞和精母细胞中诱导凋亡和分化异常。伪时间分析（图6A–C）和细胞比例分析（图6D）进一步证明了PTFE暴露组中精原细胞和精母细胞的比例增加。此外，凋亡基因Bax在精原细胞和初级精母细胞中高表达（图6E,F），进一步强化了凋亡在生殖细胞丢失中的作用。

有趣的是，PTFE暴露导致异常细胞群体（簇3）的出现，与对照组相比，该簇中凋亡细胞的比例显著增加（36.73%），而对照组为0%（图6G）。这些发现表明PTFE暴露诱导凋亡并破坏了精原细胞和精母细胞的发育。此外，细胞周期分析显示，与对照组相比，PTFE暴露组中处于G1期的细胞比例显著更高（53.26%），而对照组为32.68%（图6H,I），表明这些细胞暂时停滞。免疫荧光染色进一步证实了PTFE暴露睾丸中精原细胞和精母细胞的增加（图S7A–D，支持信息）。此外，凋亡相关基因（Bax、Caspase-3）、增殖基因（Ki67）和细胞周期相关基因（Slx4、Vrk1）在精原细胞和精母细胞中的表达下调（图S7E–I，支持信息）。相应地，PAS和TUNEL染色的睾丸切片表明PTFE暴露导致位于管外的生殖细胞和间质细胞的凋亡（图S8A–E，支持信息）。为了探索PTFE影响精母细胞和间质细胞的靶点，我们的分子对接结果表明PTFE可以直接靶向Brca1、Smc5、Cyp11a1和Cyp17a1（图S8F，支持信息），支持PTFE暴露破坏了精母细胞和间质细胞的增殖和分化平衡，并最终导致细胞凋亡。

2.6 PTFE暴露破坏雄性减数分裂过程

减数分裂是配子发生过程中的一个独特事件，在生殖细胞的遗传重组和基因组完整性维持中发挥着关键作用。[23] 为了评估PTFE暴露对减数分裂精母细胞的影响，我们进行了染色体铺展分析以研究减数分裂过程。在对照组中，SYCP1作为联会的标记物，定位于粗线期精母细胞的XY染色体的假常染色体区域（PAR），然而在PTFE暴露组中，观察到粗线期精母细胞中常染色体的非联会行为（PTFE组32.66%对比对照组8.80%）（图S9A,B，支持信息）。此外，HORMAD蛋白（HORMAD1和HORMAD2），它们是未联会或解联会染色体轴的标志物，被用来评估减数分裂的进展。在对照组的粗线期精母细胞中，约90.56%的常染色体表现出正常的联会，然而在PTFE暴露的粗线期精母细胞中，31.79%的常染色体表现出更高的常染色体非联会和联会缺陷频率（图S9C,D，支持信息），表明PTFE暴露破坏了染色体联会。

γH2AX的初始形成波发生在细线期，由ATM介导，发生在双链断裂（DSBs）之后，这一信号在DSBs的修复过程中逐渐消失。[24] 随后，在偶线期出现的由ATR介导的γH2AX波与未联会或未修复的染色体相关。[25] 在对照组和PTFE暴露的精母细胞中，在细线期和偶线期观察到γH2AX信号，表明PTFE暴露的精母细胞中DSBs的形成相对正常（图S9E，支持信息）。在自体染色体联会完成的粗线期开始时，DNA损伤反应（DDR）因子如γH2AX、MDC1和pATR通常从自体染色体上消失，并在性染色体上积累，从而诱导未联会染色质的减数分裂沉默（MSUC），称为减数分裂性染色体失活（MSCI）。[24] 为了调查PTFE暴露的精母细胞中联会缺陷是否与MSUC相关，我们进行了减数分裂染色体铺展和γH2AX与SYCP3的共染色。在对照组的粗线期精母细胞中，γH2AX信号从自体染色体上消失，并在XY体上表现出典型的γH2AX定位，表明DSBs的修复已完成。相反，大多数（13.07%）PTFE暴露的粗线期精母细胞在自体染色体上显示出持续的γH2AX信号，表明DNA损伤反应（DDR）在联会同源染色体中仍然活跃（图S9E,F，支持信息）。此外，PTFE暴露的精母细胞中观察到发育迟缓，其特征是与对照组相比，粗线期和双线期精母细胞的比例较低，表明从粗线期到双线期的进展延迟（图S9F，支持信息）。

MDC1是γH2AX结合蛋白，介导γH2AX在XY体上的染色体范围扩散。[25] 与对照组（11.74%）相比，PTFE粗线期（30.49%）中MDC1的错位显著更高（图S9G,H，支持信息），暗示染色体范围的γH2AX扩散失败。此外，磷酸化S428 ATR（P-ATR），ATR的活性形式，未能扩散到PTFE暴露的精母细胞的XY染色质中，并保留在自体染色体上（图S9I,J，支持信息）。综上所述，这些发现表明PTFE暴露破坏了γH2AX从自体染色体上的正常清除，并在减数分裂期间损害了DNA损伤反应，导致联会缺陷和减数分裂进展延迟。

2.7 PTFE靶向SKAP2损害精子发生

在精子发生过程中，单倍体精子细胞经历一系列关键事件，包括顶体形成、核凝缩和鞭毛伸长，这些事件共同由一组称为精子发生基因的基因调控。[26] 在本研究中，单细胞RNA测序显示与细胞骨架和运动相关的基因在圆形和长形精子细胞中差异表达显著（图7A），表明PTFE暴露可能通过影响精子细胞骨架的形成来影响精子发生。进一步分析鉴定了两个基因，Skap2和Ccin，它们在PTFE暴露的单倍体精子细胞中显著下调（图7B–E）。为了检查PTFE暴露后成熟精子中蛋白质水平的变化，我们分析了对照组和PTFE暴露组的附睾精子的蛋白质谱。这一分析揭示了人类中有107个差异表达蛋白，小鼠中有132个（图7F），在两个物种中识别出56个重叠的差异蛋白。GO富集分析表明这些蛋白主要涉及精子细胞骨架、顶体形成和鞭毛运动（图7G）。其中，SKAP2和CCIN引起了我们的关注，因为它们与精子发生相关（图7H）。[27] 免疫荧光染色显示，在对照组精子中，SKAP2与F-ACTIN在精子头部下侧共定位，而PTFE暴露破坏了F-ACTIN和SKAP2的正常定位（图7I），表明F-ACTIN和SKAP2在精子中的异常定位可能涉及PTFE诱导的精子畸形。

PTFE靶向SKAP2破坏精子发生过程。A）基因本体（GO）分析表明，单倍体精子细胞（圆形STids和长形STids）簇中的差异表达基因（DEGs）分别在细胞骨架功能和精子运动方面显著富集。B）UMAP图可视化对照组和80 g L−1 PTFE暴露小鼠生殖细胞中Skap2的表达模式。C,D）小提琴图展示了可变基因Skap2（C）和Ccin（D）在单倍体精子细胞簇中的表达模式。E）RT-qPCR分析表明，与对照组相比，单倍体精子细胞中Skap2和Ccin的mRNA表达水平显著降低。数据以均值±SD表示，使用双侧Student's t检验计算p值。F）维恩图展示了人类和小鼠精子中对照组或PTFE暴露组之间差异表达蛋白的重叠。三只小鼠接受80 g L−1 PTFE暴露，三个人类精子样本随机选自PTFE暴露组。G）对（F）中识别的56个重叠蛋白进行GO项分析。H）圆圈热图和列表显示了人类和小鼠精子中与精子发生相关的差异表达蛋白的重叠。颜色表示相对蛋白表达。颜色条上的数字标签表示具体的变化趋势。I）免疫荧光染色显示对照组和PTFE暴露精子中细胞骨架标记F-ACTIN（绿色）和SKAP2（红色）的表达。比例

尺 = 5 µm。J）精子DNA碎片指数（SDFI）的定量分析。SDFI指的是断裂DNA链的精子占所有精子的百分比，可用于评估精子DNA的完整性。数据以均值±SD表示，使用双侧Student's t检验计算p值。K）IVF后合子百分比的定量分析。数据以均值±SD表示，使用双侧Student's t检验计算p值。L）PTFE分子与SKAP2蛋白的对接模型。在二维相互作用图（左）中，范德华力和疏水相互作用用睫毛状符号表示，氢键用绿色虚线表示。三维结构图（右）显示氢键为红色虚线，范德华力为黄色虚线。M）293T细胞中的蛋白表达分析。在12.5 mg L−1 PTFE处理12小时后，评估野生型和突变型（Thr26在同源二聚体化区域的突变）293T细胞中SKAP2的表达水平。数据以均值±SD表示。使用双侧Student's t检验确定统计显著性。N）从对照组和PTFE处理（12.5 mg L−1处理12小时）组的睾丸中分离的单倍体精子细胞的蛋白表达水平。数据以均值±SD表示，使用双侧Student's t检验计算p值。

为了进一步探索Skap2在精子发生和男性生育能力中的生理作用，我们通过输出管将shRNA-Skap2注入生精小管，并产生了Skap2敲低（KD）小鼠睾丸（图S10A，支持信息）。7天后，Skap2的mRNA和蛋白水平显著降低（图S10B–D，支持信息）。过碘酸-希夫（PAS）染色显示正常小管，而CASA分析表明，与shControl组相比，shSkap2组的精子活力显著降低，畸形精子数量增加（图S10E–I，支持信息），这类似于PTFE诱导的异常精子发生。进一步分析显示，在PTFE暴露和SKAP2敲低小鼠中检测到DNA碎片率升高（图7J；图S10J,K，支持信息）。此外，体外IVF实验表明，PTFE暴露和SKAP2敲低显著降低了小鼠的受精率（图7K）。生育能力测试表明，敲低SKAP2导致每窝平均幼崽数量减少（图S10L，支持信息）。令人惊讶的是，观察到SKAP2与PNA的顶体共定位，这支持了SKAP2在单倍体精子细胞中的独特功能（图S10M，支持信息）。

为了进一步确认PTFE直接靶向SKAP2，我们进行了先进的分子对接分析。PTFE与SKAP2蛋白之间的对接得分为–7.062 kcal mol−1，表明结合亲和力强（得分低于–7 kcal mol−1通常反映强相互作用）。PTFE在SKAP2蛋白上显示出特定的结合位点，与NH3-Lys56和NH-Phe116形成两个氢键，距离分别为3.1 Å和3.0 Å。此外，观察到PTFE与周围残基Arg18和Thr26之间的范德华力（图7L）。这些发现表明PTFE与SKAP2的同源二聚体化区域内的氨基酸残基Arg18、Thr26以及Phe116在SKAP2的PH域内结合。这种相互作用进一步得到了细胞系中体外突变实验的支持。具体来说，Thr26的突变显著减弱了PTFE诱导的SKAP2介导的F-肌动蛋白调节的损伤（图7M），强调了PTFE对同源二聚体化区域的特异性。为了确定PTFE是否直接作用于单倍体精子细胞，而不是通过精原细胞或精母细胞间接作用，我们从小鼠睾丸中分离出单倍体精子细胞。在体外PTFE暴露后，这些细胞显示出F-肌动蛋白水平显著降低，证实了直接作用（图7N）。综上所述，这些结果提供了有力证据，表明PTFE通过直接靶向单倍体精子细胞中SKAP2的同源二聚体化域诱导弱畸精子症。

2.8 细胞外囊泡-SKAP2改善人类和小鼠的精子质量

细胞外囊泡（EVs）是膜包裹的结构，可以作为生物活性分子的载体，如蛋白质、脂质和遗传物质。[28] 在本研究中，我们筛选出SKAP2是PTFE暴露在精子发生过程中诱导的关键下游蛋白。为了确定基于细胞外囊泡的疗法是否可以拯救PTFE暴露小鼠的精子质量，我们开发了含有SKAP2的细胞外囊泡（mEVs-SKAP2），并将其注入睾丸的输出管中，并在体外与精子共孵育（图S11A，支持信息）。首先，我们评估了mEVs-SKAP2是否在小鼠中引发免疫反应。通过测量白细胞计数和血清IL-1β水平，我们发现将mEVs-SKAP2微注入生精小管并未引发显著的免疫反应（图8A,B）。这些结果支持进一步研究mEVs-SKAP2在体内的功能作用的可行性。令人惊讶的是，CASA表明，与未处理和mEVs处理组相比，mEVs-SKAP2显著提高了精子的活力（图8C,D；图S11B,C，支持信息）。重要的是，与三天治疗相比，七天方案取得了更好的结果，特别是在80 g L−1浓度下，总精子活力从65.14%增加到67.58%，前向运动能力从46.09%提高到49.52%（图8C,D；图S11D,E，支持信息）。

细胞外囊泡-SKAP2拯救PTFE诱导的小鼠精子质量下降。A）通过尾静脉采集小鼠外周血后，使用全自动血液分析仪测量白细胞计数。数据以均值±SD表示。“NS”表示无统计学显著差异。p值使用双尾Student's t检验计算。B）使用酶联免疫吸附试验（ELISA）定量小鼠血清中的IL-1β水平。数据以均值±SD表示。“NS”表示无统计学显著性。p值使用双尾Student's t检验确定。C,D）在PTFE暴露30天后，通过输出管注射3天，使用CASA分析评估各组（未处理、mEVs和mEVs-SKAP2）的总精子活力（C）和前向运动能力（D）。数据以均值±SD表示。NS表示无显著性。p值使用双侧Student's t检验确定。E）代表性Western blot显示在体外注射mEVs或mEVs-SKAP2后精子中的F-ACTIN蛋白丰度。GAPDH作为加载对照。F）对图（E）中的蛋白表达水平进行定量分析。数据以均值±SD表示。p值（Student t检验，双侧）。G）在注射后，未处理、mEVs和mEVs-SKAP2组的异常精子比例。每只小鼠计数100个精子。数据以均值±SD表示。p值（Student t检验，双侧）。

H）在注射后，未处理、mEVs和mEVs-SKAP2组的代表性差分干涉对比（DIC）图像显示了合子和2细胞胚胎。每组分析了9只雌性小鼠、160个受精卵和150个2细胞阶段胚胎。比例尺为100 µm。黑色和白色箭头分别表示合子和2细胞阶段的未受精卵。I）如（H）所示，IVF后合子和2细胞胚胎百分比的定量分析，以均值±SD表示。p值使用双侧Student's t检验计算。J）流式细胞仪分析用于评估注射后未处理、mEVs和mEVs-SKAP2组的精子DNA碎片。K）图（J）中未处理、mEVs和mEVs-SKAP2组的DNA碎片指数的统计分析。数据以均值±SD表示。p值（Student t检验，双侧）。L）生育能力测试用于确定未处理、mEVs和mEVs-SKAP2组的每窝幼崽数量。在通过输出管注射细胞外囊泡-SKAP2三天后，进行交配、阴道栓检查和幼崽数量统计。数据以均值±SD表示，p值使用双侧Student's t检验计算。

F-肌动蛋白对于精子形态和活力至关重要。因此，为了评估mEVs-SKAP2对F-ACTIN组装的影响，我们测量并发现与未处理和mEVs组相比，PTFE暴露小鼠经mEVs-SKAP2处理后的睾丸中F-ACTIN水平增加（图8E,F）。然而，我们并未观察到在注射mEVs-SKAP2后，生精小管直径和囊泡小管的显著改善（图S11F,G，支持信息）。值得注意的是，与体外共孵育相比，通过输出管注射的方法在改善畸形精子方面具有更明显的效果（图8G；图S11H，支持信息）。精子形态和活力可以影响受精能力。因此，进一步进行了体外受精（IVF）实验，使用PTFE暴露小鼠的尾部附睾精子，以及从野生型（WT）雌性小鼠中收获的卵母细胞。结果表明，与mEVs相比，mEVs-SKAP2显著提高了体内的受精率和2细胞胚胎发育（图8H,I）。此外，mEVs-SKAP2显著减少了DNA碎片，并提高了生育能力（图8J–L）。总之，这些结果表明，mEXO-SKAP2治疗可以改善聚四氟乙烯（PTFE）暴露引起的精子质量下降和受精率降低。

有趣的是，我们的研究发现mEXO-SKAP2不仅可以恢复PTFE暴露模型中的精子活力，还可以在铅暴露模型中恢复（图S11I和表S3，支持信息），进一步支持了mEVs-SKAP2在环境毒素诱导的弱畸精子症中的治疗策略。随后，为了评估mEVs-SKAP2的临床相关性，我们检查了一组7名暴露于PTFE并被诊断为弱畸精子症的患者。在将人类精液样本与mEVs-SKAP2共孵育后（图9A；表S4，支持信息），精子活力显著增加（图9B,C）。然而，精子形态并未显示出显著改善，这与小鼠在mEVs-SKAP2处理后的结果一致（图9D；图S11H，支持信息）。从机制上讲，与小鼠在mEVs-SKAP2处理后F-ACTIN增加一致，人类精子中也观察到F-ACTIN显著增加（图9E,F）。由于多种不利因素导致弱畸精子症，且限制了个体对PTFE的暴露（n = 7），我们进一步在更大一组弱畸精子症患者（n = 34）中验证了mEVs-SKAP2的治疗效果（图9G；表S4，支持信息）。

结果表明，mEVs-SKAP2也可以修复弱畸精子症个体的精子活力（图9H,I），而精子形态并未显示出显著改善（图9J）。综上所述，这些结果表明mEXO-SKAP2调节F-ACTIN细胞骨架的形成，并对弱畸精子症具有治疗潜力。

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其实这次的统计和前些年的另一次统计是一样的结论，也是发国外期刊去了~~

【Kimi2翻译：【样本与流程】 • 2023.11–2024.3，在河南、山东、湖北三家生殖中心招募 113 名 24–58 岁男性（不育≥1 年）。 • 统一用 500 °C 烧过的玻璃管收集精液和尿液，-20 °C 冻存。 • 排除睾丸外伤、炎症、隐睾、精索静脉曲张等。【检测 8 种塑料】 PS、PP、PC、PE、PVC、PTFE、PET、ABS • 10–15 % KOH 40 °C 消化 48 h → 1.2 μm 玻璃纤维滤膜 → 785 nm 拉曼显微镜比对标准谱（匹配度 ≥80 % 算阳性）。 • 每样本测 3 个粒子，空白对照 50 份全部阴性。【精液指标】按 WHO 第 5/6 版：精子浓度、总数、前向运动力、非前向运动力、正常形态。

【统计】单因素 + 多因素线性/逻辑回归，校正年龄、BMI、吸烟、饮酒、采集中心；用聚类 + 潜类别分析把人群按精液好坏再分层，最后做风险诺莫图。 ——— 结果（Results）【检出率 100 %】 113 人精液和尿里均检出微塑料；每人 2–7 种，平均 3–5 种。检出率排序：PS（100 %）> PVC（91 %）> PP（89 %）> PE（77 %）> PTFE（55 %）> PET（20 %）> PC（17 %）> ABS（2 %）。

【PTFE 最毒】 • 暴露 vs 未暴露： – 精子总数：188.90 ± 163.71 vs 207.67 ± 132.36 百万（p = 0.091，边缘） – 精子浓度：52.13 ± 47.47 vs 58.32 ± 37.26 百万/mL（p = 0.041） – 前向运动力：34.11 % ± 17.02 vs 40.29 % ± 19.06（p = 0.083）【剂量-反应】每多一种塑料： – 精子总数 ↓ 15.4 百万（95 % CI: −25.6, −5.2） – 精子浓度 ↓ 7.2 百万/mL（−12.4, −2.0） – 前向运动力 ↓ 8.3 %（−13.5, −3.1）【聚类分层】 • 把 113 人按精液参数聚成“好/差”两组：

– 高暴露组（≥6 种塑料）在“差组”占 20 %，在“好组”仅 3 %（p = 0.025）。 • 潜类别分析进一步锁定“第 IV 类”以 PTFE 为主，其精子非前向运动力最低（p = 0.007）。【风险诺莫图】用尿里塑料种类 + 年龄 + BMI 做预测模型：每多一种塑料，精子受损风险 ↑ 1.95 倍；模型 AUC 0.75，可直接当门诊辅助工具。 ——— 讨论（Discussion）【混合暴露更惨】不同塑料毒理机制叠加，血睾屏障、氧化应激、炎症“三管齐下”。动物实验亦显示 5 mg/L 以上混合微塑料即可显著降低睾丸系数、延迟青春期。】Association of mixed exposure to microplastics with sperm dysfunction: a multi-site study in China - eBioMedicine|https://www.thelancet.com/journals/ebiom/article/PIIS2352-3964(24)00405-5/fulltext

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顺带说一下，某些人说的，中医怎么证明疗效，怎么确定事故标准？目前看到的一个思路是，建立类似9体质自评量表的问卷表格，通过得分来判定阴虚、阳虚等等体质分类。然后再去作对照试验。

【128例不孕患者对照实验，治疗组64例脱落7例剩余61例，对照组64例完成59例，脱落5例。两组都有五子衍宗丸，每天早晚各1次，1次9克。治疗组多加双肾俞、关元、中极四穴贴敷隔物灸。3个月后，治疗组61例中女方妊娠25例（40.98%），对照组59例中女方妊娠14例（23.72%），P<0.05。】五子衍宗丸配合隔物灸法治疗男性不育少弱精子症临床疗效观察|http://cpfd.cnki.com.cn/Article/CPFDTOTAL-ZHZY201411008103.htm

【观察60例患者治疗前后精液常规参数指标变化、精子质量及不良反应发生情况。结果治疗后脾肾两虚型弱精子不育症患者禁欲天数、精液量、精子密度、b级精子活力与治疗前比较,差异无统计学意义（P＞ 0.05）;精子总活率、a级精子活力、a级+b级精子活力均较治疗前明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗后60例脾肾两虚型不育症患者治愈20例,显效14例,好转15例,无效11例,总有效率81.67%（49/60）。】五子衍宗丸加味治疗60例脾肾两虚型弱精子不育症患者的临床观察 - 中国知网|https://kns.cnki.net/kcms/detail/detail.aspx?dbcode=CJFD&dbname=CJFDLAST2021&filename=SJZX202110032&uniplatform=NZKPT&v=CjInX-2NiIATuqra_01izL0zDQXbcRARbyqfebr22ECgH9do-KjFfjExMWPs3f6T

【按随机数字表法将不孕患者分为观察组(n=32)和对照组(n=32)。观察组患者服用五子衍宗丸,对照组患者服用维生素C、维生素E治疗。观察两组患者中医症状、精子浓度、前向运动精子率及精子正常形态率。结果治疗后两组患者中医症状均有改善,观察组患者有效率为63.33%,高于对照组的26.67%,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组患者治疗后的精子浓度、前向运动精子率高于对照组治疗后,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者精子正常形态率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。】五子衍宗丸治疗男性不育症64例临床研究|https://www.nstl.gov.cn/paper_detail.html?id=ee350e9b541396f26a22c1db53c91400

证明有效后，未来就用自评量表做体质分类辅助校准，开药是否错误也可以用这个判定。当然北京中医药大学有红外线摄像机体质分类，可以更精准些（但也更贵，不好普及）。

不过，所有古代人试验出来的体质分类，对应药物以偏纠偏改善体质从而治疗不孕不育的疗法，在新时代的特氟龙微塑料和其他微塑料物理性穿透血睾屏障，杀伤精子，破坏性激素分泌，降低Src激酶相关磷酸化蛋白2这些“毒害”方面，能否有效，确实不好说了。

古代人不用特氟龙不粘锅啊。他们哪儿能想到后世的人会人工开发出抗降解性特别强的人工树脂然后做成锅，吃到肚子里啊。

大漆木碗之类的东西古代用的人估计也不会特别多，要么用瓷碗（釉下彩），要么用便宜的陶碗吧？漆器应该也不至于做锅去用。

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注：本文没有推荐荷叶纹不粘锅的意思，荷叶纹是中性的，不会天然不沾，荷叶自己有蜡才会不沾。物理不沾锅现在普遍贵，可能会有点效果？但性价比也未必比得上自己开锅。

只是，理论上开锅反复涂油反复烧，可能形成碳化膜，导致产生多环芳香烃和初级芳香胺类致癌物，也不见得健康。古代穷人其实也未必有很多机会吃爆炒的菜？可能要宋朝（Kimi2说是明朝？）以后油料作物多了才行？因此相关健康经验可能也不是特别多和准确。

按现在的分子毒理学研究，可能还是蒸煮焖炖的菜安全些……

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对了，法国有研究也挺反直觉的，玻璃瓶的饮料往往有更多微塑料，因为玻璃硬和塑料盖子摩擦后的脱落颗粒物更多。所以大家也不用为了减少微塑料摄入额外花钱买玻璃瓶装的橄榄油了：

法国研究发现玻璃瓶摩擦有塑料涂层的盖子后，反而释放比塑料瓶更多的微塑料；且水以外的饮料都有更多微塑料。不过，实验中对微塑料的检测种类似乎是有限的，有些颗粒物是无法鉴定物质，于是就有一些矛盾，像玻璃瓶装的水只有每升3.1个不明物质，而塑料瓶装的水有每升10.5个不明物质，这就没进入统计。【Kimi AI概括：2.1 质量控制（QA/QC）所有操作在特定的微塑料研究实验室进行，以降低空气污染和外源性微塑料的贡献。使用前，所有玻璃器具和滤器在高温炉中加热至 450°C，6 小时，以消除污染。所有溶液（包括水、70% 乙醇和 2.6% 次氯酸钠）均经过至少 8 次过滤，确保无颗粒残留。操作人员佩戴丁腈手套和实验服。

2.2 样本选择 2023 年 6 月，从当地经销商购买样本，涵盖矿泉水、啤酒、葡萄酒和软饮料（包括可乐、茶和柠檬水）。每种饮料选择 6 个样本，确保来自同一生产批次。 2.3 除气步骤为防止碳酸饮料在过滤时滤纸降解，需先除气。除气过程包括：打开样品瓶，用铝箔覆盖瓶口一周，然后在室温下以 100 rpm 磁力搅拌一小时。 2.4 样本过滤清洁所有瓶子后，用 Whatman GF/A 玻璃纤维滤器过滤样本。过滤后，用 70% 乙醇和水冲洗容器内壁、漏斗内壁和滤器边缘，以确保颗粒回收最大化。 2.5 观察与识别使用显微镜和傅里叶变换红外光谱（µFT-IR）分析滤器上的颗粒，确定其性质和聚合物类型。

2.6 盖子污染实验用清洁后的玻璃瓶进行实验，分别测试未预处理、吹气处理和吹气加水冲洗处理的盖子对微塑料污染的影响。 2.7 统计分析结果以每升微塑料数量（MPs/L）表示，使用 Shapiro-Wilk 检验确定分布的正态性，然后用 Kruskal-Wallis 检验分析不同组间的显著差异。 3. 研究结果 3.1 质量控制（QA/QC）负控和空气控样本中平均微塑料数量为 0.9 ± 1.4 MPs，正控回收率为 85.5% ± 7.7%。 3.2 微塑料形态所有饮料中仅发现纤维和碎片两种形态的微塑料。 3.3 聚合物类型聚合物分为多个类别：聚酯类（PET 和醇酸漆）、聚烯烃类（PE、PP 等）、聚甲基丙烯酸酯类（PMMA 和 PAN）、聚酰胺类（PA 和尼龙）、苯乙烯类（PS、ABS 等）和聚氯乙烯类（PVC）。

3.4 矿泉水平均微塑料含量为 2.9 ± 0.7 MPs/L，玻璃瓶中含量显著高于塑料瓶（4.5 ± 1.2 MPs/L vs. 1.6 ± 1.7 MPs/L）。 3.5 柠檬味水两种柠檬味水样本中，玻璃瓶装的微塑料含量显著高于塑料瓶装（15 ± 9.5 MPs/L vs. 2.3 ± 1.4 MPs/L）。 3.6 可乐平均微塑料含量为 31.4 ± 16.0 MPs/L，玻璃瓶中含量显著高于塑料瓶和易拉罐（103.4 ± 44.1 MPs/L vs. 2.1 ± 0.7 MPs/L 和 3.4 ± 2.1 MPs/L）。 3.7 冷茶平均微塑料含量为 28.5 ± 13.1 MPs/L，玻璃瓶中含量显著高于塑料瓶和易拉罐（86.3 ± 35.3 MPs/L vs. 2.2 ± 1.0 MPs/L 和 16.3 ± 3.9 MPs/L）。

3.8 柠檬水平均微塑料含量为 45.2 ± 21.4 MPs/L，玻璃瓶中含量显著高于塑料瓶和易拉罐（111.6 ± 41.1 MPs/L vs. 1.5 ± 0.7 MPs/L 和 10.9 ± 4.6 MPs/L）。 3.9 啤酒平均微塑料含量为 82.9 ± 13.9 MPs/L，小玻璃瓶中含量显著高于大玻璃瓶和易拉罐（133.7 ± 15.9 MPs/L vs. 32.8 ± 12.2 MPs/L 和 31.8 ± 17.3 MPs/L）。 3.10 葡萄酒平均微塑料含量为 8.2 ± 3.3 MPs/L，砖状（利乐砖）包装中含量显著高于其他容器（30.0 ± 16.9 MPs/L vs. 塑料瓶2.1 ± 0.8 MPs/L、玻璃瓶（估计是橡胶塞，人工橡胶属于微塑料）5.3 ± 2.0 MPs/L 和立方塑料袋3.7 ± 0.9 MPs/L）。

……无甜味剂可乐的微塑料含量（48.5 ± 30.6 MPs/L）显著高于含甜味剂的可乐（14.3 ± 6.2 MPs/L。莫非存在蔗糖污染？）。矿泉水（猜测是矿物质再处理强化水）的微塑料浓度（3.7 ± 1.0 MPs/L）高于泉水（1.6 ± 0.6 MPs/L。似乎矿物质添加剂本身有污染？），差异显著。气泡水的微塑料含量（3.4 ± 1.0 MPs/L）略高于静水（2.4 ± 0.9 MPs/L），但差异不显著。 3.11 盖子污染实验实验表明，未预处理的盖子会导致 287.3 ± 81.4 MPs/L 的微塑料污染，吹气处理可降低至 105.8 ± 32.1 MPs/L，吹气加水冲洗可进一步降低至 86.7 ± 42.3 MPs/L。 4. 讨论 4.1 与其他研究的比较不同研究中饮料微塑料含量差异较大，主要归因于方法学差异、样本类型和体积、以及研究国家的不同。本研究中，矿泉水微塑料含量相对较低（2.9 ± 0.7 MPs/L），而可乐和啤酒的微塑料含量较高，与以往研究结果相似。 4.2 玻璃瓶污染除葡萄酒外，玻璃瓶装饮料的微塑料含量显著高于塑料瓶装饮料。

实验证实，玻璃瓶中的微塑料主要来自盖子外层的油漆，预清洁盖子可显著降低污染水平。 5. 结论本研究首次评估了法国销售的饮料中微塑料的污染水平，发现玻璃瓶装饮料的微塑料含量更高，主要来自盖子油漆。预清洁盖子可显著降低污染水平，但无法完全消除微塑料。由于缺乏毒理学数据，目前无法确定饮用这些饮料是否会产生健康风险。】Microplastic contaminations in a set of beverages sold in France|https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0889157525005344

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以前有美国科学家悲观的预测按现在的精子成活率下降速度线性推演，2045年人类精子成活率中位数是0。

https://news.qq.com/rain/a/20210331A0AR2H00